流式细胞仪

发布者:食用野生植物保育与利用 湖北省重点实验室发布时间:2019-06-10浏览次数:115

流式细胞仪仪器使用功能介绍

  1. 本仪器工作原理简介

流式细胞仪主要由以下五个部分构成:液体流动系统;激光及光学系统;光学系统;信号处理与分析系统;细胞分类筛选系统。其基本原理可以概述为通过激光测量鞘流中染色细胞标志物的荧光强度和宽度、前向和侧向散射光强度及宽度等参数。由于荧光标记所使用的单克隆抗体种类不同,可以通过定量检测出细胞上的不同抗原物质来区分细胞,也可以用来分析细胞成分

流式细胞术flow cytometerFCM)应用流式细胞仪对悬浮液中的细胞或细胞器进行快速测量和多参数检测的细胞分析技术。依赖测量到的参数还可以用物理方法将一个群体的细胞亚群分选出来,即流式细胞分选术。激光为光源,检测生物学颗粒理化性质的仪器。

生物学颗粒:免疫复合物、DNARNA、染色体、蛋白质、细胞器等。

理化性质:细胞大小、细胞形状、细胞膜完整性、DNA含量、总蛋白含量、酶活性等。

2.本仪器应用领域范围

FCM 在肿瘤学中的应用; FCM 在血液学中的应用;FCM 在免疫学中的应用;FCM 在器官移植中的作用;FCM 在细胞凋亡方面的作用;FCM 分析神经系统疾病;FCM 检测冠心病;FCM 在精液检测中的应用。

 

   本仪器可以完成的实验技术,及每个小实验技术对应的原理简介

   (1FCM 在肿瘤学中的应用

人体中正常细胞大部分都是以二倍体存在,正常细胞在发生癌变时DNA 数量会发生变化。FCM 可以检测细胞中DNA 的含量变化从而运用于肿瘤的检测,FCM 检测标本包括实体瘤标本或穿刺标本、胸腹腔液体、膀胱冲洗液、尿液、食管镜及支气管镜钳取的少量活检组织。

   (2FCM 在血液学中的应用

FCM 在各种血液病的诊断、治疗和预后判断方面也起到了十分重要的作用, 主要是通过分析外周血细胞或骨髓细胞表面抗原和DNA 的检测来实现的。由于不同的血细胞系统都有其特有的表面抗原, FCM 通过采用特异的单克隆抗体,借助于不同的荧光染料可同时检测一个单细胞的不同参数,根据所测的参数结果来判断出该血细胞的属性。在各种急性白血病的诊断和鉴别中,一般形态学检查很难区分,而FCM 就起到了举足轻重的作用。

FCM 在白血病免疫分型应用方面也起到重要的作用。目前国内外均主张采用FCM CD45/SSC 双参数散点网设计方法进行白血病免疫分型。该方法可以将骨髓细胞清晰地分成淋巴细胞、成熟粒细胞、单核细胞、幼稚细胞和有核红细胞群,排除了正常细胞对免疫分型的干扰,使细胞免疫分型的准确性大大提。

FCM 在血小板相关疾病的诊断中也有许多应用。当受到外界刺激时血小板会被活化而发生一系列改变。从血小板膜的糖蛋白表达水平的高低可判断血小板的活化程度, FCM 通过测定血小板膜糖蛋白的表达情况来为血小板膜糖蛋白异常所致疾病的诊断提供依据。在血栓性疾病的诊断和治疗中,这种测定可以评价活化血小板程度在血栓性疾病和血栓前状态发生、发展中的作用。

   (3FCM 在免疫学中的应用

机体是否患病的一个重要指标是免疫状态是否正常, FCM 技术目前已广泛用来监测机体的免疫状态,T B 和自然杀伤淋巴细胞的水平是检验免疫状态的一个重要指标。其中T 细胞主要包括Th Ts两个细胞亚群,Th 细胞是T 细胞中表面分化抗原簇标志为CD4+ 的一种亚群,而Th 细胞是以CD8+ 为表面主要标志的T 细胞。CD16 CD56 等是自然杀伤细胞的表面主要标志;CD ,。是B 细胞的表面标志[14]通过表面标志物质监测各细胞及细胞内各种细胞因子在体内的水平, 以及对患者淋巴细胞各亚群数量的测定, 可监控患者的免疫状态, 并作为诊断、治疗相关疾病的重要依据。

   (4FCM 在器官移植中的作用

在器官移植中,FCM 可被用来判断供者与受者配型是否合适,并鉴别和定型同种异体反应抗体。FCM 还可通过监测移植后免疫表型的变化来预测移植后的免疫排斥反应、细胞免疫治疗效果以及移植的存活情况等,可以更敏感地预测排斥反应的发生,从而为临床治疗提供有效依。

   (5FCM 在细胞凋亡方面的作用

FCM 是目前应用较多的对细胞凋亡进行分析和检测的方法,结合荧光染色,可对单细胞做多参数分析。FCM 除了可以定量监测细胞凋亡数和凋亡指数外, 还可同时测定凋亡细胞发生于某个特定的细胞周期;通过测定细胞的增殖率与死亡率,可以早期测定药物的疗效。FCM 技术在细胞凋亡方面的另外一个优势在于它可以将凋亡和坏死区别开。

   (6FCM 分析神经系统疾病

FCM 技术在神经系统疾病中的应用主要是分析脑脊液中T 淋巴细胞及其亚群,根据脑脊液中的T 淋巴细胞亚群不同来进行疾病诊断和治疗。在分析神经系统炎性疾病方面,FCM 技术比常规的脑脊液检测具有更高的敏感性,并可同时分析出脑脊液免疫状况,对神经系统炎性疾病病情的了解和监测具有一定的临床意。

   (7FCM 检测冠心病

患者血清P 选择素水平可早期反映冠状动脉损伤事件, 因其与Gensini 冠状动脉病变评分呈正相关,也可用于检测冠心病病情及预后判断。在检测冠心病患者方面, FCM 与其他技术相比的优势也在于它的敏感性, 其敏感度为酶联免疫吸附试验的25 倍。

   (8FCM 在精液检测中的应用

主要是通过对不同时期的细胞数据和精子的各种指标进行分析,为临床诊断精子发生障碍的性质、原因和程度提供客观的数据支持,对无、少及弱精子等的判断、治疗及治疗效果进行评。